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【关键词】大肠埃希菌 氨基耱苷类 耐药性 超广谱β内酰胺酶
【Abstract】Objective To investigate the distribution of Escherichia Coli and antimicrobial resistance guide drug treatment and reasonable application of antibiotics in clinic. Methods The strain identification and drug sensitivity test was conducted by MicroScan WalkAway240 Full-automatic testing system of microbiology. Results Among 965 isolates obtained，the resistance to Gentamicin, kanamycin, streptomycin, Tobramycin, netilmicin, amikacin, each was 65.58%,60.15%, 52.26%, 40.94%, 16.98%, 11.21% in 2008; but 68.08%,62.75%,56.96%,40.64%,20.68%,14.31%in 2009. ESBLs-producing Escherichia coli resistant to gentamicin highest rate, the maximum sensitivity to amikacin. Conclusio Drug Resistant Strain for aminoglycosides had the tendency of increase. Escherichia coli to different aminoglycoside antibiotic resistance in varying degrees.Clinical disease resistance surveillance should be strengthened，and a reasonable choice based on susceptibility test results antibacterial drugs to guide the clinical use of drugs.
【Key words】Escherichiacoli Ecoli aminoglycosides resistance ESBLs
国内各地近年来报道大肠埃希菌(Escherichiacoli，E.coli)对氨基糖苷类药物(aminoglycosides，AGs)的耐药形势逐渐严峻，其耐药机制最重要的是产生氨基糖苷类修饰酶，此类酶作用于药物特定的氨基或羟基，使药物钝化，使其降低或丧失对靶位核糖体的亲和力，使细菌药物存在的情况下仍能存活。随着抗菌药物广泛的应用，大肠埃希(ECO) 的耐药率呈逐年上升趋势，并出现对多种抗菌药物耐药，而由该菌引起的感染已成为临床较为棘手的问题。ECO的耐药机制很多，如细菌产生灭活酶或钝化酶对抗菌药物的灭活与修饰；抗菌药物作用靶位的改变；膜对抗菌药物的通透性下降，药物摄入减少；膜对抗菌药物的主动外排，药物排出增加；细菌形成生物被膜；其中以产酶最为重要，针对ECO对临床常用抗菌药物的耐药性及超广谱口一内酰胺酶(ESBLs)基因、氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物耐药基因携带情况进行研究。
为此本文对临床分离的耐氨基糖苷类药物对大肠埃希菌的耐药进行了相关分析，为临床合理选用AGs药物提供理论依据。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1菌株来源分离自本院2008年1月至2009年12月非肠道感染的住院病例大肠埃希菌965株(不含同一病人同一部位感染的重复菌株)，经MicroScan WalkAway-40型全自动细菌鉴定仪鉴定。大肠埃希菌质控株ATCC 25922购自国家临床检验中心。
1.1.2主要试剂：链霉素、庆大霉素、布霉素、卡那霉素、阿米卡星、奈替米星纸片均购自杭州天和微生物试剂公司；M-H培养基、胰大豆蛋白胨肉汤购自英国Oxiod公司；LB液体培养基购自上海生工生物技术公司；Biospin细菌基因组DNA提取试剂盒购自杭州博日科技有限公司；2×Taq PCR MasterMix试剂盒、电泳琼脂糖购自北京天根生化科技公司。
1.2方法
药物敏感试验按NCCLS推荐的纸片扩散法(Kerby-Bauer法)测定965株大肠埃希菌对氨基糖苷类药物的耐药率。
1.3 质控菌株 大场埃希菌ATCC25922由临检中心提供。
1.4 细菌鉴定与药敏测定 按照《全国临床检验操作规程》第2版的要求接种羊血平板、麦康凯平板和SS平板，35℃孵育过夜，分离出单个菌落。血液及部分体液标本用法国生物梅里埃公司BacT/Alert120血培养仪培养。用美国德灵MicroScan Walk2Away240全自动微生物分析仪及阴性菌药敏复合板同时进行菌株鉴定与药敏测定。药敏检测方法为微量稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)，结果判读按照CLSI/NCCLS制定的标准[1]。
1.5 数据处理二、本表的统计数字来自微量肉汤稀释法药敏试验，根据CLSI的解释标准来判断抗生素敏感。 2 结果
2.1 细菌分部:临床各科病区
2.2 药敏结果 大肠埃希菌共分离出大肠埃希菌965株，6种氨基糖苷类药物（庆大霉素、卡那霉素、链霉素、妥布霉素、奈替米星、阿米卡星）的耐药率，PCR法检测6种氨基糖苷类修饰酶基因。2008年度对庆大霉素、卡那霉素、链霉素、妥布霉素、奈替米星、阿米卡星的耐药率分别为：65．58％、60.15％、52.26％、40.94％、16.98％，11.21 %。2009年度庆大霉素、卡那霉素、链霉素、妥布霉素、奈替米星、阿米卡星的耐药率分别为：68.08％、62.75％、56．96％、40.64％、20．68％，14.31 %，本院大肠埃希菌多重耐药非常严重，阿米卡星对大肠埃希菌有较好抗菌活性。(耐药率均<20%)。具体见表1及表2。
表1 2008年我院病原菌(大肠埃希菌)469株耐药率统计
各种氨基糖苷类药物耐药菌总数及耐药率09年度比08年度有上升。
阿米卡星对大肠埃希菌有较好抗菌活性。(耐药率均<20%)
2.3大肠埃希菌中ESBLs情况：
2008年大肠埃希菌菌株数量：469株 ESBL(+)68.23%ESBL(-)41.93%；2009年大肠埃希菌菌株数量：496株 ESBL(+)70.78%ESBL(-)41.23%：庆大霉素70.8％、链霉素65.27％、卡那霉素62.16％妥布霉素50.05％、奈替米星18.92％、阿米卡星10.81％。ＥＳＢＬｓ的产生可使大肠埃希菌对ＡＧｓ的耐药情况重，提示ＥＳＢＬｓ和ＡＧｓ引起的耐药可能存在着一定的相关性。
3 讨论
氨基糖苷类抗生素对于细菌的作用主要是抑制其蛋白质的合成。细菌产生氨基糖苷类耐药性的机制有多种，包括降低药物在细菌胞内的浓度、主动外排，酶的修饰钝化作用，核糖体结合位点的改变等，由不同的基因决定。大肠埃希菌(ECO) 的耐药率呈逐年上升趋势，并出现对多种抗菌药物耐药，而由该菌引起的感染已成为临床较为棘手的问题。ECO的耐药机制很多，如细菌产生灭活酶或钝化酶对抗菌药物的灭活与修饰；抗菌药物作用靶位的改变；膜对抗菌药物的通透性下降，药物摄入减少；膜对抗菌药物的主动外排，药物排出增加；细菌形成生物被膜。临床分离的株产ESBI。大肠埃希菌对庆大霉素的耐药率最高，达到68.08%，其次为链霉素(65．27％)和卡那霉素(62．16％)，对奈替米星(18．92％)和阿米卡星(10.81％)的耐药率较低。这可能与阿米卡星、奈替米星是经过结构改造、对修饰酶具有一定稳定性有关。所以耐药率远低于庆大霉素和妥布霉素.本地区产ＥＳＢＬｓ大肠埃希菌对ＡＧｓ的耐药结果是：Ｇ＞Ｓ＞Ｋ＞Ｔ＞Ｎ＞Ａ，这可能与ＡＧｓ的使用频率和种类不同有关，以及与大肠埃希菌耐药特性有关。
综上所述，本地细菌产ＥＳＢＬｓ大肠埃希菌流行严重，ＥＳＢＬｓ的产生可使大肠埃希菌对ＡＧｓ的耐药情况加重，说明ＥＳＢＬｓ和ＡＧｓ引起的耐药可能存在着一定的相关性，但其具体原因很复杂，值得进一步探讨和研究。因此临床医生在经验性选用ＡＧｓ治疗产ＥＳＢＬｓ大肠埃希菌引起的感染时要慎重。
参考文献
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