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微小RNA在人类老化和性别对循环的影响
摘要
miRNA（miRNAs）已被报道为各种疾病的潜在有用的生物标志物
包括癌症、糖尿病、心脏病、神经系统疾病及与年龄有关的疾病。
在本研究中，我们的目的是确定是否表达水平的循环
血清中miRNAs随年龄或性别而改变。七例老年男性血清标本（69.86例）
1.77岁）女性（72.43岁～1.49岁），男青年（26.17～0.83岁）
和女性（23.17岁1.52岁），从主体的前臂休息。的表达
通过实时荧光定量测定血清中循环miR-146a miR-20a的水平
PCR。在所有组中miR-146a表达水平无差异。那里
在这个主要作用在miR-20a水平均显著降低，具有显著的交互作用
老年男性受试者相比，年轻男性受试者没有观察到差异
年轻或老年女性受试者（P = 0.004，P = 0.971）。这些结果表明
并不是所有的miRNAs都受老化的影响，但只有一些miRNAs
可由老化效应选择性地改变。
关键词
血清，衰老，性别差异，生物标志物
*
通讯作者。
S. Sawada等人。
一百五十三
1。介绍
微小RNA（miRNA）是一种小的非编码RNA，长度约为22个核苷酸。miRNA
随着3’非翻译区（UTR）相互作用的靶基因通过5’端序列，从而降低
和/或抑制翻译的基因。因此，推测miRNAs参与了控制
各种生物现象[ 1 ] [ 2 ]。miRNA被认为是潜在的有用的生物标志物
各种疾病包括癌症、糖尿病、心脏病、神经系统疾病和与年龄有关的疾病
[ 3 ] - [ 12 ]。
以往的研究表明，一些miRNA的表达水平随着年龄和性别的变化而改变。对于
例如，在240个miRNAs中，小鼠的62%个miRNAs的表达水平存在性别差异
脑组织[ 13 ]。在人类中，肝组织中miR-26a表达水平在女性高于男性
[ 14 ]。也有报道说，miRNA的表达随老化在几个组织和血液。例如,
在小鼠心脏599个miRNA中，有31个miRNAs下调，34个miRNAs上调
随着老化超过1.5倍[ 15 ]。利用实时定量PCR分析表明miR-34a增加
老年人和小鼠的心脏[ 16 ]。近年来，有人建议衰老细胞积累
老年人[ 17 ]。衰老细胞的小鼠和人类的一些miRNAs，包括miR-34a
和miR-146a，增加[ 18 ] - [ 20 ]。其他的一些研究已经表明，miR-20a表达与
各种衰老模型[ 21 ] - [ 25 ]。其他的研究也表明，循环miR-21 [ 26 ]水平，
和mir-151a-3p，miR-181a-5p和mir-1248在老年受试者相比明显下降
年轻科目[ 27 ]。
一个以前的研究报道，是一个循环miR-146a急性发作后明显升高
耐力运动[ 28 ]。相反，我们发现，循环水平显著下降三
人类急性抵抗运动后的第29天，提示循环miRNAs差异
受不同类型运动的影响。其他研究也显示，降低循环中
在败血症或系统性红斑狼疮患者[ 30 ] [ 31 ]，并增加肝细胞癌患者
癌或肝硬化[ 32 ]，慢性丙型肝炎病毒感染[ 33 ]，充血性心力衰竭
[ 19 ]。这些结果可能表明miR-146a的可能影响循环老化，这是密切相关的
炎症，或雌激素，具有很强的抗氧化能力，并在绝经后减少
女人.然而，目前还不清楚是否老化或性别差异是混杂的miR-146a表达的因素
在流通中。
另一方面，据报道，然后是细胞衰老相关，如上所述，但
老化对血液中miR-20a表达的影响进行了评估。在以往的研究中，miR-20a表达
在血液中增高的高危患者前列腺癌风险评估评分[ 34 ]，
早期宫颈鳞状细胞癌淋巴结转移[ 35 ]，丙型肝炎病毒感染[ 36 ]，
鼻咽癌[ 37 ]，乳腺癌[ 38 ]和胃癌[ 39 ]，全身性患者减少
红斑狼疮[ 40 ]与慢性阻塞性肺疾病[ 41 ]。然而，目前还不清楚是否
老龄化和性别差异是混杂因素在循环miR-20a表达。
本研究的目的是评估是否循环miR-146a和miR-20a的表达水平
血清中W 2。方法
2.1。学科与伦理认同
老年人，年龄在65岁至78岁，被招募的参与者在特定健康的资格
草津町，群马地区体检，与东京老年学研究所合作。
另一方面，年轻的受试者，年龄在19岁至30岁，从早稻田大学招募。数据
从七名老年男性（69.86岁为1.77岁）和女性（约为72.43岁），和六名年轻男性
本研究采用（26.17～0.83岁）及女性（23.17～1.52岁）。
所有受试者均获得书面知情同意书。这项研究的伦理批准符合
按照《赫尔辛基宣言》的标准，研究协议得到东京都
医学伦理委员会和早稻田大学伦理委员会研究所。
S. Sawada等人。
一百五十四
2.2。血液采样和RNA分离
静脉血样本取自受试者的前臂休息。离心法制备血清样品
整个血在1000×G 10分钟后在室温下孵育30分钟。然后，
400µl血清混合了五卷QIAzol reagent（Qiagen公司，瓦伦西亚，CA）。允许正常化
样本样本变异的RNA提取，合成C. elegansmiRNAs，cel-mir-39，CEL米尔—
54、cel-mir-238（合成RNA寡核苷酸由Fasmac、小田原、日本合成），添加（25
在5μL总体积的每个寡核苷酸fmol）每个样本。这些样品存放在−80˚C直到
分析。
总RNA，包括小RNAs，从400µL血清分离与miRNeasy Mini Kit（Qiagen公司，瓦伦西亚，
根据制造商的指示，有一些修改。简单地说，添加氯仿
对血清混合，qiazol和合成线虫miRNA，cel-mir-39，cel-mir-54和cel-mir-238，
在相同的体积以及血清和涡旋。离心后15分钟在12000×G在4˚C，上
水相转移到一个新的收集管，与1.5体积的100%乙醇混合，并转移
一种试剂微型离心柱。离心后1分钟在15000×G在25˚C、缓冲区700μL
RWT和500μl缓冲RPE加入试剂微型柱离心旋转
15000分钟×G在25˚C洗柱。最后用50 L洗脱洗脱液洗脱RNA。
2.3。miRNA的表达分析
TaqMan microRNA反转录试剂盒和TaqMan microRNA检测（应用生物系统公司，Foster
市、CA）进行实时PCR定量成熟miR-146a和miR-20a表达水平
[ 29 ]。的cel-mir-39作为miRNA表达水平的外源性控制。结果
实时定量PCR首先呈现为CT值，并ΔΔCT值计算每个miRNA的使
对cel-mir-39 CT值和miR-146a或miR-20a的平均CT值，用公式2−ΔΔCT，我们计
年轻女性、老年男性和老年女性与年轻男性的折叠变化。
2.4。统计分析
定量miRNA表达数据采用ΔCT值进行归一化cel-mir-39，为目
miRNA。非成对双向方差分析检验组间差异。统计意义
成立于P < 0.05。数据作为均值标准误差（SE）。
三.结果
3.1。比较循环miR-146a miR-20a的水平
男性和女性之间循环miR-146a miR-20a的水平，和年轻人和老年人
进行比较以确定年龄×性相互作用。的表达水平无显着差异
老年人和年轻人之间的表达（P = 0.151；图1（a））。为miR-146a倍数变化
在老年受试者为0.706相比，年轻的主题。我们发现，也没有差异
男性与女性间的miR-146a水平（P = 0.757；图1（b））。为miR-146a倍数变化
与男性相比，女性为0.947。
另一方面，miR-20a水平明显较低的中老年人相比，年轻的学科
（p = 0.032；图2（a））。在老年受试者miR-20a变化倍数为0.584。然而，有
男性和女性组无差异（P = 0.922；图2（b））。然后在褶皱的变化为
女性组为1.066。我们也观察到显着的相互作用在这个主效应，miR-20a的水平
显着降低老年男性受试者相比，年轻男性受试者没有观察到差异
在年轻或老年女性受试者（P = 0.004和P = 0.971，分别图（C））。当有关
青年男性受试者的平均值为标准值，老年男性受试者的倍性变化为0.346；
年轻女性受试者为0.606，老年女性受试者为0.598（图2（C））。CT值
对于miRNA的方法年龄和性别差异是重要的混杂因素，当使用医疗数据作为生物标志物，也
分析miRNA数据时。首先，我们专注于老化，因为它已被报道，然后和我—
146a是细胞衰老相关。细胞衰老是一种不可逆的细胞周期停滞的状态，它已经
