外周血淋巴细胞_慢性淋巴细胞白血病患者临床资料分析和外周血调节性T细胞的百分

相关热词搜索：

CD38、ZAP-70与CLL预后也有着密切关系[3]。

Mellstedt等[4]发现CLL造成外周血异常。他的研究揭示出CLL患者外周血会出现部分T细胞亚群数量及功能出现异常情况。调节性T细胞（regulatory T cells，Treg）的生理功能有很多，主要有三点。首先维持免疫自稳，其次调解外周耐受，最后防止自身免疫。实现其生理过程主要是通过直接与其他类型免疫细胞相互作用或通过免疫抑制因子抑制免疫应答。

1.2 方法

1.2.1 样品制备采集受检者清晨空腹时的外周血4 mL, 置于无菌EDTA抗凝管内；用PBS以1:1稀释抗凝血，用Ficoll分离出单个核细胞，调整细胞密度为2×106个/mL。每管加入100 μL细胞悬液；实验组管中在核细胞悬液的基础上加入5ul PerCP标记的小鼠抗人CD4mAb，再取5ulFITC标记的小鼠抗人CD25mAb一同加入到细胞悬液中，充分混匀后快速4℃避光孵育30 min；空白组管中只加入100ul的血液单个核细胞悬液，作为空白对照。用预冷的PBS缓冲液洗涤、离心；除去上清液, 重悬细胞, 每管中加入1 mL新鲜配制的1×固定/穿透缓冲液，用漩涡混匀器混匀，4℃避光孵育30 min；2 mL 1×穿透缓冲液洗涤、离心、弃上清液，再重复1次；实验组离心管中加入80 μL穿透缓冲液后，再加入PE标记的小鼠抗人Foxp3抗体5 μL，空白组离心管中只加入大鼠IgG2a作为同型对照。用2 mL 1×穿透缓冲液洗涤、离心、去上清液，再重复1次；加适量流式细胞术染色缓冲液, 上机分析。

取CLL患者治疗前肝素抗凝的骨髓1mL,用PBS以1:1稀释抗凝骨髓，用Ficoll分离出单个核细胞，调整细胞密度为2×106个/mL。每管加入100 μL细胞悬液；加入抗人单克隆抗体(CD45-PerCP﹑CD19-FITC、CD38-APC)各20 μL, 避光孵育15 min；再加入1 000 μL红细胞裂解液,用漩涡混匀器混匀, 避光孵育5~ 10 min。1500 r/min离心5 min后小心弃除上清。加入1mL PBS缓冲液重悬细胞，离心，弃上清。加入500ulPBS后用枪头轻轻吹打直到混匀，然后上流式细胞仪进行检测。

1.2.4 统计分析用SPSS17.0统计分析数据。采用方式描述定量资料。应用t检验比较组间差异；方差不齐时采用t’检验。Treg细胞与预后因素如：CD38、β2-MG、Zap70、Binet分期等，采用Pearson或Spearman相关分析。P <0.05为有统计学意义。2.3.3 初诊CLL患者CD4+CD25+Treg与CD38表达率、β-MG表达量的关系初诊CLL的CD38表达率≥30%患者外周血中CD4+CD25+ Treg细胞数为（5.81±3.15）%，CD38表达率<30%患者为（5.30±2.16）%，二者比较差异无统计学意义（P >0.05）；相关性分析示差异无统计学意义。

这种细胞有着独特的免疫调节作用，它的特征性标记为Foxp3。CD4+CD25+ Treg细胞在Foxp3阳性表达的前提下才能够发挥它自身的独特免疫调节作用[29]。国内外研究提示Treg细胞数量减少或功能失调可能导致自身免疫性疾病发生，反之可能促进癌变[28,30]。目前对Treg细胞数量增高在CLL中的作用和功能尚不清楚，有研究认为Treg细胞数量增高是CLL疾病发展的结果，但有部分学者认为Treg细胞数量增高参与了CLL的发生，因此研究Treg细胞在CLL发病机制中的作用已成为热点。本研究结果显示初诊CLL患者外周血中T细胞数量（67.40±15.46）%、治疗后（32.85±28.34 ）%明显高于健康组（25.85±8.24）%，初诊CLL患者T细胞数量明显高于治疗后；CD4+CD25+Treg在CLL患者治疗前、治疗后及治疗组、健康组的比较无统计学意义。这个与Piper等[31]发现不相符。他们发现CLL患者治疗后外周血Treg细胞有所降低，甚至降至正常水平。

有研究[34]认为Treg可以作为CLL预后的指标。它能够评估及判断CLL的预后情况。2006年美国CLL临床指南中提出临床分期（Binet和Rai分期）、CD38表达水平、β2-MG量、ZAP70表达水平、IgVH基因突变状态、性别、细胞遗传学改变等为预后指标。

小结

[1] 该地区的病人在就诊时绝大多数已经出现了明显的症状或体征。血红蛋白、β2-MG在Rai 0~Ⅱ期患者与Ⅲ~Ⅳ期患者中有明显差异，其他常规实验室检查两组间比较无统计学意义。

[2] 在CLL患者治疗前后，Treg细胞均高于健康者；在治疗前后比较中，治疗前Treg细胞高表达。