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【摘要】 目的: 观察荭叶心通软胶囊对大鼠的长期毒性。方法: 160只SD大鼠,随机分为高、中、低剂量组及空白对照组,雌雄各半,每日灌胃1次,连续给药26周,观察大鼠的一般状况、体重、摄食量和给药13、26周及停药后4周大鼠的血液学、血液生化学、凝血功能、脏器系数、解剖学及病理组织学改变的情况。 结果: 荭叶心通软胶囊高剂量组雌性大鼠给药13周总胆红素(TBIL)、给药26周肌酐(CREA)和TBIL、给药26周凝血酯原时间(PT)及高剂量组雄性大鼠给药26周Cl-浓度与对照组比较稍有差异,停药4周后即恢复正常,组织病理学检查无异常。其余各剂量组各项指标与对照组比较差异均无显着性。结论: 荭叶心通软胶囊在临床剂量范围内毒性小,使用安全。
【关键词】 毒性试验; 红蓼; 大鼠,Sprague-Dawley; 荭叶心通软胶囊; 长期毒性
[Abstract] Objective: To study the long-term toxicity of Hongyexintong soft capsules to rats.Methods: One hundred and sixty SD rats were randomly pided into four groups (40 in each group), and orally given the medicine with doses of 50, 25, or 12.5 g/kg of crude drug, or with bean oil of 0.5%CMC-Na (for control group) daily for 26 weeks.The physical status (body weight,growth rate and appetite), hematological parameters, blood biochemistry, blood cotting, organ index, and tissue pathological changes of rats were checked in the 13th week,and 26th week of the administration and in four weeks after the stop of the administration. Results: All of the parameters tested did not differ from those of control group, except that blood level of total bilirubin (TBIL) of female rats in high dose group in the 13th week, blood creatinine level, blood TBIL level, and prothrombin time of male rats in high dose group in the 26th week were significantly higher than those of control group (P<0.05), and that blood Cl-level of male rats in high dose group in the 26th week was lower than that of control group (P<0.05). All the differences disappeared in 4 weeks after the drug withdrawal. No tissue pathological change was found. Conclusion: Hongyexintong soft capsules are safe in its clinical use with the recommended dosages.
[Key words] toxicity tests; Polygonum orientale; rats,Sprague-Dawley; Hongyexintong soft capsules; long-term toxicity
冠心病心绞痛属于中医的胸痹心痛的范畴,为临床常见病、多发病,主要病机为心脉痹阻,即心脉运化失常,气血运行受阻,致使气结血凝而发生胸闷、心痛等症,故治宜活血化瘀、通脉止痛为主[1~4]。新药荭叶心通软胶囊是由荭草、山楂叶等活血、散血、止痛为主的药味组成,是根据民间验方,经现代提取工艺精制而成的复方制剂,具有活血化瘀、通脉止痛的功能[5,6]。临床拟用于治疗冠心病心绞痛心血瘀阻证,症见胸闷、胸部刺痛、固定不移、心悸不宁、唇舌暗紫、脉细涩等冠心病心绞痛类疾病。为观察其长期用药可能出现的慢性毒性反应,2006年5~11月,根据中药新药长期毒性实验方法和指导原则,观察了大鼠连续灌胃给药26周及停药恢复4周的毒性反应情况,为临床应用荭叶心通软胶囊的安全性提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 药物、动物、主要仪器和试剂
荭叶心通软胶囊,内容物为棕褐色膏状物,每粒重0.45 g(含生药5 g),成人每日服用量为4.05 g(相当于生药45 g),即成人日用量为0.75 g生药/kg。批号20040525,由贵州益佰制药股份有限公司提供。Ⅱ级实验动物SD大鼠160只(雌雄各半),体重73~85 g,合格证号:SCXK(黔)2002-0001,由贵阳医学院实验动物中心提供。试验动物进入清洁实验室后雌雄分笼,每笼5只,饲养1周,观察动物活动、进食、大小便均无异常后开始试验。动物室光照充足,通风和空调设备良好,室温18~25 ℃,相对湿度50%~70%,实验室按常规定期消毒。
CELL-DYN1700全自动全血细胞计数仪(美国),ABBOTT-AEROSET 2000型全自动生化分析仪(美国),SYSMEX CA7000全自动血凝仪(日本),奥林巴斯显微镜(日本),METTLERAE240型电子天平(日本)。
CK检测试剂盒,BUN检测试剂盒,CREA检测试剂盒,TG检测试剂盒,CHOL检测试剂盒,TBIL检测试剂盒,ALP检测试剂盒,均为上海科华生物工程股份有限公司生产。
1.2 动物分组及给药取SD大鼠按体重随机分为4组,每组40只,雌雄各半。高、中、低给药组剂量为:50.0、25.0和12.5 g/kg(生药,相当于临床人用量的66.6倍、33.3倍、16.6倍),对照组给予等容积0.5%CMC-Na溶液配制的大豆油(10 ml/kg)。各组按剂量每日上午8∶00~9∶00时灌胃给药1次,给药量为10 ml·kg-1·d-1,连续给药26周,每周给药6 d。第13周末各组取雌、雄大鼠各5只处死,进行检查。第26周末各组取雌、雄大鼠各10只处死,进行检查。其余动物停药后继续饲养4周进行恢复性观察。
1.3 观察指标及数据处理
给药期和恢复期每天均进行详细观察,记录试验动物的外观体征和行为活动情况、精神状况、进食、大小便及口、鼻、眼异常物和被毛等情况有无异常。每周观察1次体重和进食量,并按体重变化调整给药量。给药13周、26周及停药4周后处死动物取血,检测血液学指标RBC、HGB、HCT、RETIC、WBC、PLT等,血液生化学指标AST、ALT、ALP、γ-GT、BUN、CREA、TP、ALB、Glu、TBIL、CHOL、TG、CK、Na+、K+、Cl-浓度等,凝血指标PT、APTT、TT等。
试验动物处死后计算脏器系数,包括心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、子宫、卵巢、甲状腺等脏器或组织,同时肉眼观察各主要脏器的解剖学改变。取高剂量组和对照组动物的脑、脊髓、脑垂体、胸腺、甲状腺、食管、唾液腺、胃、小肠、回肠、结肠、大肠、肝脏、胰腺、肾脏、肾上腺、脾脏、心脏、气管、肺脏、主动脉、睾丸、附睾、卵巢、子宫、前列腺、膀胱、视神经、骨髓、淋巴结等脏器进行病理组织学检查。
上述指标均用SPSS 13.0软件进行方差分析、非参数检验及统计学处理。
2 结果
2.1 对动物一般情况的影响在整个试验期内未发现动物的行为活动、饮食、呼吸、大小便和被毛色泽等情况有任何异常,未见呕吐、流涎、流泪、呼吸困难等症状,无一动物死亡。
2.2 对动物体重、进食量的影响各组动物给药后,生长发育良好,体重增长,进食量正常,与对照组比较差异无显着性(P>0.05)。见图1~图4。
2.3 对大鼠血液学指标的影响血液学检查结果表明,给药期及停药期3个剂量组血液生化指标检测结果与对照组比较差异无显着性(P>0.05)。
2.4 对大鼠血液生化指标的影响
曲线血液生化指标检查结果表明,荭叶心通软胶囊高剂量组给药13周雌性大鼠TBIL,给药26周CREA、TBIL,与对照组比较明显降低(P<0.05);雄性大鼠给药26周Cl-浓度与对照组比较明显增高(P<0.05);其余各组各项指标均未见异常,恢复期各项指标均正常,与对照组相比较差异无显着性(P>0.05)。
2.5 对大鼠凝血系统的影响
给药期26周雌性高剂量组凝血指标PT有所升高,对照组(9.69±0.74)s,高剂量组(11.06±1.28)s,与对照组比较有统计学意义(P<0.05),恢复期对照组(9.92±1.45)s、高剂量组(9.54±0.76)s,与对照组相比较差异无显着性(P>0.05),其余各项指标均未见异常。
2.6 对大鼠脏器系数和病理组织学的影响
各给药组脏器系数与对照组比较差异无显着性(P>0.05)。各主要脏器表面光滑,无粘连,色泽正常,未见充血、肿胀、出血、坏死,胃肠无扩张,肠壁无水肿、出血、溃疡等异常现象。病理组织学检查各剂量组组织结构与对照组比较均无退变、坏死、炎症反应或异常增生变化,停药4周的各项检查也未见迟发性毒性反应。
3 讨论
3.1 荭叶心通软胶囊的成人推荐用量为4.05 g/d(即生药0.75 g/kg)。急性毒性试验表明,本品毒性较低(小鼠的最大给生药量为206.4 g/kg,相当于临床日用量的275倍;大鼠的最大给生药量为103.2 g/kg,相当于临床日用量的138倍),根据中药新药长期毒性试验技术指导原则,长期毒性的高剂量组应不低于推荐临床人用有效剂量的50倍,中剂量组不低于药效学的高剂量组,故长期毒性的高剂量组设计为生药50.0 g/kg,相当于临床用量的66.6倍),中剂量为高剂量的1/2倍(相当于临床用量的33.3倍),低剂量为高剂量的1/4倍(相当于临床用量的16.6倍)。
3.2 荭叶心通软胶囊来源于贵州黔东南州的民间验方,用于胸痛、胸闷、气短、中风偏瘫(嘴角歪斜)、风湿疼痛等疾病的治疗。对本方的临床应用、组方及药材资源进行了长期大量的调查研究,并在此基础上采用现代提取分离技术,将其制备成软胶囊制剂。本实验以3个剂量连续给大鼠灌胃26周,进行长期毒性试验。结果表明本品各剂量组动物生长状态良好,体重增长,摄食量正常,血液学指标无异常反应,血液生化和凝血指标变化均在正常值范围内,体内各主要脏器未见药物引起的病理学改变,恢复期各项指标恢复正常,未见迟发性毒性反应。综合实验结果,提示荭叶心通软胶囊在临床剂量范围内毒性小,使用安全。
【参考文献】
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